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siRNA轉(zhuǎn)原代肌腱細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑
更新時(shí)間:2024-06-26
訪問(wèn)量:1425
廠商性質(zhì):代理商
生產(chǎn)地址:美國(guó)
siRNA轉(zhuǎn)原代肌腱細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑
一、產(chǎn)品說(shuō)明:
1、產(chǎn)品名稱
Advanced DNA RNA Transfection Reagent
2、品牌
ZETA LIFE
2、包裝規(guī)格
貨號(hào):AD600075
規(guī)格:0.75ml
3、儲(chǔ)存條件
常溫運(yùn)輸,4℃保存,可保存兩年,拒絕反復(fù)凍融。
二、使用說(shuō)明:
1、材料準(zhǔn)備
RNA 濃度 20 uM /L
質(zhì)粒 DNA 濃度 300 ng-2 ug/ul(注意:①溶解于無(wú)菌雙蒸水或超純水;②無(wú)內(nèi)毒素 )
2、操作步驟
提前 1 天接種細(xì)胞:細(xì)胞匯合度在 60-80%左右,再進(jìn)行轉(zhuǎn)染。
核酸復(fù)合物制備:將核酸與轉(zhuǎn)染試劑按照 1:1 關(guān)系直接混合,用移液器吹吸 10-15 次混勻,室溫靜 止 10-15 分鐘。
在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入核酸復(fù)合物:根據(jù)參考用量在細(xì)胞中加入核酸復(fù)合物,并輕輕混勻;細(xì)胞培養(yǎng)基 里面可以含有血清。
細(xì)胞換液:轉(zhuǎn)染 24 小時(shí)后對(duì)細(xì)胞進(jìn)行正常換液,懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染過(guò)程中不用換液。
分析結(jié)果:質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)染 48-72 小時(shí)后熒光檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率,48-96 小時(shí)檢測(cè) mRNA 或蛋白表達(dá)。若 進(jìn)行穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株的篩選,則在轉(zhuǎn)染后 24-48 小時(shí)左右加入適量的藥物進(jìn)行篩選。siRNA 轉(zhuǎn)染后 9 小時(shí)熒光檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率,48-72 小時(shí)檢測(cè) mRNA 或蛋白表達(dá)。
三、注意事項(xiàng):
1、質(zhì)粒 DNA 必須溶解于無(wú)菌雙蒸水或超純水,但不能溶解于提取試劑盒提供的 Buffer。溶解于 Buffer 的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率會(huì)下降 80%左右,甚至?xí)D(zhuǎn)染失敗。
2、質(zhì)粒必須去除內(nèi)毒素,內(nèi)毒素對(duì)細(xì)胞將產(chǎn)生很大的細(xì)胞毒性,會(huì)導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率下降 70%-80%左 右,甚至導(dǎo)致轉(zhuǎn)染失?。ㄍ扑]使用 Qiagen、TIANGEN、Omega 去內(nèi)毒素質(zhì)粒提取試劑盒)。
3、復(fù)合物的制備過(guò)程中是絕對(duì)不能用其他任何試劑對(duì)核酸或轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行稀釋,只需將核酸和轉(zhuǎn)染 試劑兩者按 1:1 比例直接混合,如果進(jìn)行了稀釋會(huì)導(dǎo)致轉(zhuǎn)染失。
4、轉(zhuǎn)染試劑與核酸混勻后用移液器吹打 10-15 次,室溫孵育 10-15 分鐘后即可加入細(xì)胞培養(yǎng)板。
5、轉(zhuǎn)染 24 小時(shí)后進(jìn)行正常換液,不能像 Lipo2000 一樣轉(zhuǎn)染 4-6 小時(shí)后換液。
6、原代細(xì)胞、免疫細(xì)胞轉(zhuǎn)染時(shí),細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基里面不能含有雙抗培養(yǎng)基。
四、各品牌轉(zhuǎn)染試劑類型與Zeta Life轉(zhuǎn)染試劑的差異比較:
1、Thermo品牌Lipo 2000采用陽(yáng)離子脂質(zhì)體,需要更換培養(yǎng)基;特點(diǎn)是毒性大;轉(zhuǎn)染前后需要更換培養(yǎng)基;可以轉(zhuǎn)染質(zhì)粒DNA、siRNA(效果差)。
2、Thermo品牌Lipo 3000采用陽(yáng)離子脂質(zhì)體,需要更換培養(yǎng)基;特點(diǎn)是相比Lipo 2000毒性略??;轉(zhuǎn)染前后需要更換培養(yǎng)基;可以轉(zhuǎn)染質(zhì)粒DNA、siRNA(效果較差)。
3、Thermo品牌RNAiMAX采用陽(yáng)離子脂質(zhì)體,需要更換培養(yǎng)基;特點(diǎn)是專門用來(lái)轉(zhuǎn)RNA,對(duì)于細(xì)胞系的轉(zhuǎn)染效率一般,對(duì)干細(xì)胞和神經(jīng)原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染效果差。
4、Promega品牌FuGENE 6采用脂質(zhì)混合體、特定緩沖液,需要更換培養(yǎng)基;特點(diǎn)是本質(zhì)還是脂質(zhì)體;只能轉(zhuǎn)DNA;含有微量動(dòng)物源成分,適用細(xì)胞種類因此受限;轉(zhuǎn)染前后需要更換培養(yǎng)基;親塑性,轉(zhuǎn)染效率會(huì)因使用PE管(塑料管)而大打折扣。
5、Roche品牌FuGENE HD采用脂質(zhì)混合體、特定緩沖液,需要更換培養(yǎng)基;特點(diǎn)是本質(zhì)還是脂質(zhì)體;只能轉(zhuǎn)DNA;親塑性,轉(zhuǎn)染效率會(huì)因使用PE管(塑料管)而大打折扣。
6、Zeta Life品牌Advanced系列采用新型工業(yè)材料,不需要更換培養(yǎng)基;特點(diǎn)是不需要換液,無(wú)細(xì)胞毒性,轉(zhuǎn)染效率高,適用細(xì)胞種類多,可轉(zhuǎn)染質(zhì)粒DNA、siRNA及小動(dòng)物活體轉(zhuǎn)染。
siRNA轉(zhuǎn)原代肌腱細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑各規(guī)格:
品牌:美國(guó)Zeta Life 貨號(hào):AD600025 0.25ml
品牌:美國(guó)Zeta Life 貨號(hào):AD600050 0.5ml
品牌:美國(guó)Zeta Life 貨號(hào):AD600075 0.75ml
品牌:美國(guó)Zeta Life 貨號(hào):AD600150 1.5ml
品牌:美國(guó)Zeta Life 貨號(hào):AD600500 5ml
品牌:美國(guó)Zeta Life 貨號(hào):AD601000 10ml