穩(wěn)定載體時，為什么載體上通常有兩個抗性基因？

構(gòu)建的載體上有兩個抗性基因，但一般只有一個抗性用來篩細(xì)胞。兩個抗性基因的本質(zhì)區(qū)別是什么呢？

我們來看看這個例子，現(xiàn)在這個是pcDNA3.1質(zhì)粒的圖譜，載體上有兩個抗性基因，Amp（氨芐青霉素）和Neo（新霉素）。

氨芐青霉素是在bla啟動子驅(qū)動下表達(dá)，bla是原核表達(dá)啟動子，在大腸桿菌可以表達(dá)，因此，轉(zhuǎn)化后的質(zhì)粒用Amp可以篩選出來。

而新霉素是在SV40啟動子驅(qū)動下表達(dá)，SV40是真核表達(dá)啟動子，轉(zhuǎn)入真核細(xì)胞后表達(dá)，所以只有轉(zhuǎn)進(jìn)了載體的細(xì)胞才能被篩選出來。

所以，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染時，載體上的兩個抗性基因，一個用于構(gòu)建克隆時篩選細(xì)菌，另一個用來對轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選。

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