細(xì)胞轉(zhuǎn)染總是失??？一文教你如何做好細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)

細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)是指將外源分子如DNA，RNA等導(dǎo)入真核細(xì)胞的技術(shù)。其在研究基因功能、調(diào)控基因表達(dá)、突變分析和蛋白質(zhì)生產(chǎn)等實(shí)驗(yàn)和應(yīng)用中使用越來(lái)越廣泛。然而，轉(zhuǎn)染效率低下卻一直是科研工作者們經(jīng)常遇到的一大難題。尤其是原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染，更是因?yàn)殡y度大，效率低從而使得科研人員們頭痛不已，談“轉(zhuǎn)染"色變······

這里，小編根據(jù)收集做細(xì)胞轉(zhuǎn)染多年的經(jīng)驗(yàn)和體會(huì)，總結(jié)出了以下導(dǎo)致細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率低下，經(jīng)?！胺?的大坑，以及避免掉坑里的一些做法。

影響細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的因素, 轉(zhuǎn)染中經(jīng)常翻車的點(diǎn)

影響轉(zhuǎn)染效率的因素有很多，細(xì)胞株本身的特性和活性，細(xì)胞培養(yǎng)條件，轉(zhuǎn)染的DNA 或RNA 的質(zhì)量， 轉(zhuǎn)染方法，轉(zhuǎn)染試劑的選擇等。

一、準(zhǔn)備不充分、轉(zhuǎn)染條件不佳

一般情況下，做細(xì)胞轉(zhuǎn)染時(shí)除了必要的試劑、細(xì)胞和DNA等要準(zhǔn)備充分外，實(shí)驗(yàn)的條件和操作步驟要求等都應(yīng)該嚴(yán)格遵守。比如：脂質(zhì)體的用量、DNA濃度、細(xì)胞密度、脂質(zhì)體和DNA混合孵育時(shí)間等。只有避免這些人為因素導(dǎo)致的低級(jí)錯(cuò)誤才能更好地分析提高轉(zhuǎn)染效率的方法。

二、細(xì)胞問(wèn)題：狀態(tài)不好、污染等

對(duì)于細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)，細(xì)胞自然是其中較為重要的實(shí)驗(yàn)材料之一。在實(shí)驗(yàn)室時(shí)，每次細(xì)胞轉(zhuǎn)染之前都要檢查細(xì)胞狀態(tài)和細(xì)胞密度是否合適。一般進(jìn)行轉(zhuǎn)染的細(xì)胞應(yīng)該是在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，如果不合適或細(xì)胞狀態(tài)太差，那寧可晚幾天做轉(zhuǎn)染，也不能盲目地去做實(shí)驗(yàn)。否則只會(huì)偷雞不成蝕把米，大大影響后續(xù)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

三、轉(zhuǎn)染的DNA質(zhì)量不好：濃度太低、克隆不對(duì)等

當(dāng)我們?cè)谧黾?xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)時(shí)，需要轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒DNA的質(zhì)量也是影響轉(zhuǎn)染效率的一大因素。如果DNA的濃度太低、純度不夠或者含有細(xì)菌LPS或其他對(duì)細(xì)胞有毒害作用的物質(zhì)，也會(huì)導(dǎo)致我們轉(zhuǎn)染效率低下甚至失敗。此外值得注意的是，實(shí)驗(yàn)中常常需要轉(zhuǎn)染的并不是質(zhì)粒DNA，而是RNA。對(duì)于轉(zhuǎn)染RNA而言，我們一般推薦Zeta Life公司Advanced系列轉(zhuǎn)染試劑，它的優(yōu)勢(shì)是市面上所有的RNA ，Zeta Life 公司Advanced系列轉(zhuǎn)染試劑都可以轉(zhuǎn)染。這是一種采用的是新型小分子多肽材料，其特點(diǎn)是非脂質(zhì)體材料，可通過(guò)細(xì)胞主動(dòng)吞噬吸收進(jìn)入細(xì)胞，進(jìn)入細(xì)胞后可以被代謝。之所以選擇這一款產(chǎn)品，主要是由于其具有超高的轉(zhuǎn)染效率，對(duì)細(xì)胞無(wú)內(nèi)毒素影響，不易出現(xiàn)細(xì)胞死亡，易于優(yōu)化，具有出色的轉(zhuǎn)染效率，適用細(xì)胞種類多，以及簡(jiǎn)單快速的實(shí)驗(yàn)方案等優(yōu)點(diǎn)。

實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，只需在細(xì)胞融合度為在60%-80%時(shí)進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染，質(zhì)粒DNA（或RNA）與轉(zhuǎn)染試劑直接1：1混合，無(wú)需分別稀釋再混合。全程使用含血清的*培養(yǎng)基，不需要轉(zhuǎn)染前后兩次更換培養(yǎng)基。使用簡(jiǎn)單、快速且具有很高的轉(zhuǎn)染效率。

四、細(xì)胞本身轉(zhuǎn)染困難

對(duì)于細(xì)胞本身轉(zhuǎn)染困難這個(gè)問(wèn)題，就并非人為原因了，細(xì)胞類型的不同相應(yīng)的轉(zhuǎn)染效率也會(huì)差很多。尤其是對(duì)于最難轉(zhuǎn)染的干細(xì)胞，就更是令大家伙頭疼，甚至讓大家聞之色變。但是，屏幕前的讀者可能想不到，其實(shí)對(duì)于很多有經(jīng)驗(yàn)的科研人員來(lái)說(shuō)，在多能干細(xì)胞(PSC)和神經(jīng)干細(xì)胞(NSC)這些細(xì)胞中，照樣能獲得高達(dá)80%或更高的轉(zhuǎn)染效率，在間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)中獲得高達(dá)45%的轉(zhuǎn)染效率。至于他們是如何做到如此優(yōu)秀的？用的就是Zeta Life公司Advanced系列轉(zhuǎn)染試劑。各種細(xì)胞類型中最高的轉(zhuǎn)染效率。可用于多種真核細(xì)胞系的DNA轉(zhuǎn)染、siRNA轉(zhuǎn)染和共轉(zhuǎn)染；可用于各種原代細(xì)胞的DNA轉(zhuǎn)染、siRNA轉(zhuǎn)染；可轉(zhuǎn)染極度難轉(zhuǎn)染的免疫細(xì)胞、懸浮細(xì)胞、原代細(xì)胞、干細(xì)胞等。

五、轉(zhuǎn)染試劑選擇不對(duì)

轉(zhuǎn)染試劑的好壞，直接影響了細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)的成敗。如果，你對(duì)于現(xiàn)今市面上復(fù)雜的轉(zhuǎn)染試劑還不了解，那么這款A(yù)dvanced DNA RNA Transfection Reagent就是你的*！

Advanced DNA RNA Transfection Reagent轉(zhuǎn)染試劑采用中新型小分子多肽材料，包含了較為*的小分子材料轉(zhuǎn)染技術(shù)，能夠提供高效的轉(zhuǎn)染性能，改善相關(guān)應(yīng)用的結(jié)果及可重復(fù)性。此試劑可將轉(zhuǎn)染效率提升數(shù)倍，并可改善細(xì)胞活性，廣泛適用于難轉(zhuǎn)染的及常見的細(xì)胞類型（例如RAW264.7細(xì)胞和THP-1細(xì)胞）。

1、有效轉(zhuǎn)染難于轉(zhuǎn)染的細(xì)胞

Advanced DNA RNA Transfection Reagent轉(zhuǎn)染試劑專門針對(duì)難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞種類進(jìn)行了優(yōu)化，能夠?yàn)閺V泛的細(xì)胞種類提供突出的轉(zhuǎn)染性能。即使是在原代細(xì)胞和干細(xì)胞等難轉(zhuǎn)細(xì)胞中，也能實(shí)現(xiàn)高效轉(zhuǎn)染。

2、助力癌癥研究

使用與癌癥相關(guān)的細(xì)胞系得到與您研究的問(wèn)題相關(guān)的答案。憑借更廣的適用細(xì)胞類型、更高的轉(zhuǎn)染效率，Advanced DNA RNA Transfection Reagent轉(zhuǎn)染試劑讓您能夠靈活選擇研究所用的細(xì)胞系。

3、在低毒條件下獲得優(yōu)異的轉(zhuǎn)染效率

Advanced DNA RNA Transfection Reagent的多肽小分子用量在很寬的動(dòng)態(tài)范圍內(nèi)均能保持很高的轉(zhuǎn)染效率，可按需進(jìn)行簡(jiǎn)便快速的條件優(yōu)化。在需要將細(xì)胞損傷降到至低的相關(guān)應(yīng)用中。

4、在新型基因組編輯的相關(guān)應(yīng)用中獲得高轉(zhuǎn)染效率

Advanced DNA RNA Transfection Reagent適用于新型基因組編輯的相關(guān)應(yīng)用。通過(guò)高效率的轉(zhuǎn)染，它能夠增加TALEN或CRISPR系統(tǒng)剪切和重組的成功概率，最終使得基因修飾的效率實(shí)現(xiàn)，并簡(jiǎn)化后續(xù)處理步驟。

與傳統(tǒng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑的效果比較： 

以上說(shuō)了這么多，也給大家安利了一些實(shí)用的產(chǎn)品，相信大家對(duì)于如何提高細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率也更加有了信心。