Get到這幾招，方可輕松搞定SDS-PAGE電泳實(shí)驗(yàn)！

SDS-PAGE 作為一個(gè)老生常談的實(shí)驗(yàn)，早已廣為科研者所知。然而該實(shí)驗(yàn)雖然基礎(chǔ)，但是細(xì)節(jié)繁瑣，耗時(shí)長(zhǎng)久，光是配制試劑就要花費(fèi) 2 個(gè)小時(shí)左右。而這還只是 Western blot（WB）的第一步，也使得完成 WB 實(shí)驗(yàn)將會(huì)耗費(fèi) 2 天左右的時(shí)間。 這也難怪科研者們常說(shuō)，一入 WB 深似海，從此休閑是路人。不過(guò)，實(shí)踐出真知，長(zhǎng)期在該實(shí)驗(yàn)里跌爬滾打也總結(jié)出了若干小技巧，可使大家輕松快捷的完成該實(shí)驗(yàn)。

1、未雨綢繆，做好萬(wàn)全準(zhǔn)備 

常言道，不打無(wú)準(zhǔn)備之仗，方能立于不敗之地。實(shí)驗(yàn)中種種試劑、抗體等等均是完成實(shí)驗(yàn)這座大廈的基石，如果基石打不牢，實(shí)驗(yàn)很有可能會(huì)半路夭折。而實(shí)驗(yàn)中最痛苦的莫過(guò)于與實(shí)驗(yàn)結(jié)果就差那么一步之遙。

以 Western blot（WB）為例，這眼瞅著就要到條帶現(xiàn)身的奇跡時(shí)刻，卻愣是讓曝光試劑的匱乏給硬生生的截?cái)嗔艘?jiàn)證過(guò)程，又怎會(huì)不讓人懊惱上火呢？ 

其實(shí)，上述窘境皆是科研者在實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備不足所致，若是能提前發(fā)現(xiàn)試劑的不足，或?qū)υ噭┲匦掠嗁?gòu)，又或者重新配制溶液，均能再次推進(jìn)實(shí)驗(yàn)進(jìn)程。然而就這訂購(gòu)或配制試劑的過(guò)程無(wú)疑會(huì)消耗我們的時(shí)間以及精力。 

那么為了避免原材料浪費(fèi)以及節(jié)省更多的時(shí)間，SDS-PAGE 電泳過(guò)程中的一些試劑還是早早的配制并妥善保存起來(lái)為好，如此方可以備不時(shí)之需。

緩沖液（buffer）: 

關(guān)于這一點(diǎn)，你可能早已知曉，但再次重復(fù)一遍也不是壞事。實(shí)驗(yàn)中可將所有的凝膠緩沖液進(jìn)行一次性大量配制，如此可方便后續(xù)實(shí)驗(yàn)中對(duì)其的任意使用。至于配制的濃度，10x 濃度是實(shí)驗(yàn)室配制母液常用的濃度。有些實(shí)驗(yàn)室會(huì)多次重復(fù)利用這些凝膠電泳緩沖液，在這種情況下，建議每次使用 buffer 時(shí)均要在緩沖瓶上貼一個(gè)標(biāo)簽，已記錄使用的次數(shù)，超過(guò)一定期限后就要對(duì)緩沖液進(jìn)行重新配制，以免對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成影響。

過(guò)硫酸銨（APS）： 

在接觸 SDS-PAGE 電泳之初，每次配膠時(shí)均會(huì)制備新鮮的 APS，可后來(lái)發(fā)現(xiàn)溶解后的 APS 在分裝后，可在-20℃冰箱中得以長(zhǎng)期儲(chǔ)存。另外，如果你需要經(jīng)常使用 SDS-PAGE 凝膠，那么可取出一只分裝后的 APS 溶液，將其置于 4℃冰箱里，可保證其一個(gè)月不會(huì)過(guò)期。

凝膠（gel）： 

凝膠是現(xiàn)用現(xiàn)配的好，已成為了各位心中的常識(shí)，那么是不是就意味著凝膠不能提前制備么？其實(shí)不然，提前準(zhǔn)備好的凝膠在 4℃冰箱中大致可以保持兩周左右。但需要謹(jǐn)記的是在儲(chǔ)存凝膠時(shí)，保持凝膠濕潤(rùn)是非常重要?？梢詫⒛z板、梳子甚至整個(gè)固定裝置都裝入一個(gè)充滿蒸餾水的塑料盒中，而后再將其放在 4℃冰箱中進(jìn)行保存。

樣品（sample）：

大家都知道，制備好的蛋白樣品要放在-20℃冰箱中進(jìn)行存儲(chǔ)，有時(shí)一些稀少珍貴的樣品甚至還要放在-80℃冰箱里保存。在此，建議在儲(chǔ)存近期就要進(jìn)行 PAGE 電泳的蛋白樣品時(shí)，可將該蛋白樣品與 loading  buffer 混合在一起，加熱變性之后再進(jìn)行儲(chǔ)存。如此就可以在上樣前，將蛋白樣品解凍并離心即可。用該法儲(chǔ)存樣品長(zhǎng)達(dá)一年的時(shí)間，且實(shí)驗(yàn)結(jié)果依然沒(méi)有被破壞。

2、改變分離膠的覆蓋液體 

通常多數(shù)人在制備好分離膠后，會(huì)用蒸餾水覆蓋其上，以避免分離膠的高低不平。但是實(shí)際上，此時(shí)用異丙醇代替水的效果會(huì)更好，因?yàn)楫惐伎梢愿帽Ｗo(hù)凝膠，并使凝膠更快地發(fā)生聚合，進(jìn)而節(jié)省制膠的時(shí)間。

3、緩沖液不夠用？準(zhǔn)備些彈珠吧 

有時(shí)，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，你會(huì)忽然發(fā)現(xiàn)沒(méi)有足夠的電泳緩沖液，此時(shí)一個(gè)節(jié)省時(shí)間的方法就是在現(xiàn)有電泳緩沖液添加一些彈珠（是的，就是我們小時(shí)候曾經(jīng)玩過(guò)的），以提高緩沖液的高度水平來(lái)保證緩沖液能沒(méi)過(guò)上樣孔。 但是要確保這些彈珠是潔凈的，否則一旦其對(duì)上樣的蛋白樣品造成了污染，就不要妄想此次實(shí)驗(yàn)會(huì)得到一張漂亮的實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖片了。

4、傳輸緩沖區(qū) 

每個(gè)做 SDS-PAGE 電泳的童鞋，只怕都擔(dān)心過(guò)內(nèi)腔中的電泳緩沖液會(huì)有所泄露，畢竟當(dāng)緩沖液水平降低過(guò)多，以至于不能達(dá)到覆蓋加樣孔時(shí)，就會(huì)導(dǎo)致孔內(nèi)變得干燥，進(jìn)而使得凝膠電泳變得無(wú)法正常運(yùn)行。也許，有人會(huì)建議你，當(dāng)你發(fā)現(xiàn)緩沖液下降的太過(guò)厲害，則需要暫停電泳，打開(kāi)電泳槽，重新給內(nèi)腔添加電泳液，而后再次開(kāi)啟電泳過(guò)程?？赡茈娪酒陂g你會(huì)多次重復(fù)該過(guò)程直至實(shí)驗(yàn)完成為止。

顯然，該方法需要大家時(shí)刻關(guān)注電泳槽內(nèi)腔類(lèi)電泳液的高低水平變化，其實(shí)也是蠻費(fèi)時(shí)費(fèi)力的。而有個(gè)簡(jiǎn)單粗暴的做法，即一次性在內(nèi)腔外部也添加同水平的電泳液，如此便可以一勞永逸的解決內(nèi)腔電泳液泄露問(wèn)題。

參考文獻(xiàn)：SDS-PAGE Tips and Tricks to Save You Time